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分析高速离心机的离心分离方法
点击次数:1339 发布时间:2018-04-28
  制备型超高速离心机的几种分离方法:
 
  A.差速离心:逐次增加离心力,每次可沉降样品溶液中的一些组份。
 
  差速离心是一种zui常用的方法。在这种方法中,离心管在开始时装满了均一的样品溶液。通过在一定速度下一定时间的离心后,就可得到两个部份:沉淀和上清液。
 
  通常在*次离心时把大部分不需要的大粒子沉降去掉。这时所需的组份大部分仍留在上清液中。然后将收集到的上清液以更高速度离心,把所需的粒子沉积下来。离心的时间要选择得当,使大部份不需要的更小的粒子仍留在上清液中。对于得到的沉淀和上清液可以进行进一步的离心,直到达到所需要的分离纯度为止。
 
  差速离心的特点是操作简单,但分离纯度不高。
 
  B.密度梯度离心法:可以同时使样品中几个或全部组份分离,具有很好的分辨率。
 
  (1)速率区带法(ratezonal):
 
  根据样品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步骤如下:
 
  在离心管中装入密度梯度溶液,溶液的密度从离心管顶部至底部逐渐增加(正梯度)。
 
  将所需分离的样品小心地加至密度梯度溶液的顶部。样品在梯度溶液表面形成一负梯度。
 
  由于不同大小的粒子在离心力作用下,在梯度中移动的速度不一样,所以经过离心后会形成几条分开的样品区带。
 
  注意:样品粒子的密度必须大于梯度液注中任一点的密度。离心过程必须在区带到达管子底部前停止。
 
  (2)等密度离心法(isopycnic):
 
  根据粒子的不同密度来分离。离心过程中,粒子会移至与它本身密度相同的地方形成区带。
 
  密度样度的选择要使梯度的范围包括所有待分离粒子的密度。样品可以在密度梯度液粒上面或均匀分布在密度梯度中。经离心后,样品粒子达到它们的平衡点。
 
  注意:平衡后粒子的分离完全由其密度决定,与时间无关,此时再改变离心转速,只能改变区带的相对位置。
 
  密度梯度分析法
 
  (1)梯度介质性质与选择:
 
  A、应具备的性质:
 
  梯度物质的选择原则是满足分离方法的基本要求,一个理想的密度材料标准它应是:
 
  所形成的溶液密度应包括所需要的密度范围。
 
  具有某些性质,如折射率,据此可测定它的浓度。
 
  所形成的溶液粘度低。
 
  不损伤所分离的样品。
 
  离心分离后容易除去。
 
  不妨碍分离积分的分析。

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